使用T7 SP6引物或特异性引物有哪些优点和缺点

同楼上,当初我问老师这个问题时,他说大学才学这么深

引物,是一小段单链DNA或RNA,作为DNA复制的起始点,在核酸合成反应时,作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链,在引物的3′-OH上,核苷酸以二酯链形式进行合成,因此引物的3′-O

在聚合作用的起始时,可以刺激合成另一种大分子,并与反应物以共价键形式连接的序列.在核酸化学中,引物是一段短的单链RNA或DNA片段,可结合在核酸链上与之互补的区域,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,

用PP5.0或oligo软件.网上有很多说明书的,操作十分简单再问：等于白说

关键就是这个引物的设计,如果你能设计好并且成功RT-PCR,那就没问题了.

首先要知道这段基因的序列,然后可以用软件来设计,如Primer我就知道这个,看到别人用,很好推荐

随机引物PCR如果是RAPD的话,是要用单引物的一般是10bp大小的,CG含量要高于60%.

在pcr仪中进行它会经过加热退火加热过程完成一次链式反应,可以设定反应的次数.

一般引物设计时,要保证有12-15个碱基和模板完全匹配.而且引物的3‘端不能与其他位置配对,不能被封闭,最多封闭3个碱基.上游引物,下游引物,和他们之间尽量减少二聚体.保证GC含量在45-55之间.还

是从NCBI里面的序列库中搜索的,自动搜索符合筛选条件的序列,从而给出引物序列blast是要求NCBI里面有的序列才能验证.你研究的物种基因组测序结果发布了吗?如果发布了的话就不用担心序列不全了

博凌科为-为你是这样,其实片段在一定的范围最好,为什么呢,太长了,片段多,可错配几率就很高,举个例子：两条高特异性的引物如果串成个长的引物,它的错配率不是高了一倍,但为什么说在一定范围呢,因为错配和T

先blast一下,引物特异性不好再改变条件也没意义引物GC%5‘端或中间高3’低,3’端5个碱基内尽量不要有连在一起的CG且少于3个.引物不要在串联重复区,比如Alu上如果引物没有问题,可以减少引物浓

就是指引物与该匹配的目标模板以很高程度匹配（一般是100%）,衡量值是detaG的绝对值在适度的范围较高.而此引物在基因组其他位置没有配率很高的地方,衡量水平是detaG的绝对值越小越好.这样设计出来

NCBI上面得到的是mRNA序列可以用oligodt反转录,也可以用与mRNA互补的特异引物来反转录再问：恩，特异性引物有一对，上游和下游，老师问我用上游还是下游，望回答具体点再答：反转录当然是下游了

我用primer5设计出来的Tm值从来都是直接当退火温度用.用引物primer-blast的话我都是直接贴序列上去.有其他菌的匹配很正常,有些进化亲缘性很近的,只要在同一物种中没有匹配上的问题应该不大

不要怕软件评分只管去做就是了只要重叠的部分足够就能做出来实在不行就先做一次然后回收目的条带为模板再做一次再问：我的目的条带是1000多个bp，跑胶出来的结果才750bp左右，然后我就不知道怎么办了……

是DNA,即使你要做翻转录PCR使用的引物也会是DNA,因为DNA要比RNA稳定很多,并且PCR的原理是依照半保留复制的原理进行的.

不用太纠结,有点儿具体也是可以的,一般都能P出来.再问：很多mRNA选择设计不同长度的引物，没有一对是无found显示的，真的很让人纠结；请问文献上的引物有的也是这样吗，不完美，但能扩出来，不会影响q

没错,DNA的两条连是互补的,但是引物绝对不可以互补.引物是放在DNA两条连的各一端引导游离DNA上DNA链,不仅不可以互补,还要尽可能的不同.

—————————————我是一楼————————————————————首先你要确保你的PP5是破解过的,不是DEMO版的.DEMO版的PP5是不能添加序列的.然后打开程序,点File→NEW→DN