在做转化时,外源DNA与感受态细胞混匀后为什么要冰上放置30分钟

1感受态细菌细胞经过处理,更容易吸收外界DNA.2非感受态细菌也能被转化,但效率非常低.

1、“切开的质粒”等于“线性DNA”.2、“线性DNA转化细菌、以及真菌的原生质体”已经成功.所以,切开的质粒能转化进入感受态细菌.但是,不能复制.如果质粒上带有与细菌染色体上同源序列,质粒可以重组交

因为这时候抗抗生素的基因还没有表达出产物,加入抗生素会把细胞杀死.不过青霉素是个例外,因为青霉素只是阻止细菌细胞壁的合成,而不是直接杀死细胞,所以它只是抑制增殖,细胞还可以存活,然后表达抗青霉素基因,

动能与势能转化方面的应该注意的问题简单陈述如下：（1）首先分析决定动能大小的因素,决定重力势能（或弹性势能）大小的因素——看动能和重力势能（或弹性势能）如何变化.（2）还要注意动能和势能相互转化过程中

两个目的：①热激后的大肠杆菌细胞比较脆弱,培养可以恢复细胞的活性；②进一步培养,提高菌液中大肠杆菌的浓度.

一般保存是在-80摄氏度,-20度可以放一段时间,但不能太长.底部有沉淀正常,甘油只是悬浮菌体,而不能溶解,久了就会沉淀下来!转化质粒失败是其他原因,最大可能性是感受态无活性,建议重做感受态,及做即用

冰浴过程中,原来加在溶液中的钙离子和细菌细胞膜结合,在低温下形成液晶结构,这样,在42度热激下,这种液晶结构收缩,将细胞膜扯开孔道,使DNA进入细菌细胞中.这就是原理.前面冰浴不清楚,热激我认为是让已

可能性很多.1、感受态不好.“待细菌达到对数生长期（OD600为0.5-0.6）”,你测OD了吗?其实很麻烦,建议稍微有点混就好用了；感受态细菌在无抗生素培养基上能否生长?2、菌株与质粒不兼容.3、转

低温有助于核酸的吸附,只要30min内冰浴不要完全融化就行,也不要晃动,静置最好.

问题描述不清.“同时做对照：质粒酶切回收的产物电转”?也就是说拿线性的质粒去电转做对照?如果是这样,你不如用感受态细胞直接做阴性对照,再用原质粒转化做阳性对照,这样更好分析结果.多克隆位点是很小一段,

温育就是让感受态回复一下状态,以及一些相关抗性基因的表达,毕竟从-80的环境中取出,需要一段时间适应,然后方可转化.

氯化钙法（CalciumChloride）本方法适用于批量制备大肠杆菌感受态细胞,所得感受态细胞可以获得5x106到2x107转化克隆/微克超螺旋质粒DNA材料（MATERIALS）缓冲液和溶液（Bu

要看你做的是什么了.大肠杆菌感受态根据用处的不同,也有很多种类,比如比较常见的TOP10、DH5α,质粒保存较为稳定的JM109、STBL3,表达所用的BL21等等.除此之外,植物基因转化常用土壤农杆

冰浴是为了质粒附着在菌体表面,热击是打开通道让质粒进入,觉得LZ的做法影响不大,不过要实际验证

膜相关DNA结合蛋白：位于细胞表面,经细胞自溶素处理后能暴露出来,从而具有与DNA结合的活性.核酸酶：降解外源双链DNA中的被核酸内切酶切开的一条链,使最终进入细胞的外源DNA只有一条链.细胞自溶素：

影响感受态细胞转化效率的因素及实际操作过程中应注意的事项：1．细菌的生长状态：实验中应密切注视细菌的生长状态和密度,尽量使用对数生长期的细胞（一般通过检测OD600来控制.DH5α菌株OD600为0.

你直接拿没有切的质粒去转化涂板看有没有长如果长了就是连接的问题如果没长就是感受态的问题

这是用热激法进行的转化.以大肠杆菌为例,大肠杆菌在0摄氏度的氯化钙低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基—钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42摄氏度短时间热冲击处理,促

所谓的转化是将外源DNA分子引入受体细胞,使之获得新的遗传性状的一种手段,它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术.在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人

电击法是利用高压脉冲,去处理细胞,在细胞膜表面形成一个20~40nm的瞬间空洞,这样外源基因就可以扩散进入细胞内；而氯化钙法是将处于对数生长期的细菌置于0℃的cacl2低渗溶液中,使细胞膨胀,同时ca