ECORI xho 1 双酶切

看你是哪个公司的酶了,NEB的省时内切酶半个小时就足够了,如果是常规的酶的话,酶切过夜吧.

解决办法：1、cla1是一个比较不常见的酶,可能酶切体系和ECOR1的缓冲体系不一样,试着分别酶切,就是先切cla1,然后纯化后切ECOR1；或者查找哪个酶的酶切效率高些,那个后切；2、3个小时可能太

我觉得用elutionbuffer没太大的影响,如果你非要觉得不好的话,只能在转化一遍重新提质粒或者抽成干粉再加水.我们一般用水就行.实在不行去测序呀.提的质粒和空质粒可以比较,如果你插入的基因足够大

双酶切之后,由于用的两种酶切出来的粘性末端序列不一样,所以一般载体不会再自连.而你说的载体和基因片段再重新连起来,也是不太可能的,因为连接反应是需要ATP提供能量的,酶切体系里面没有ATP,所以不会再

1）质粒上没有这两种酶的酶切位点（或操作失误,试验失败）2）质粒上只有一种酶的酶切位点或两个酶的位点非常接近（

因为双酶切可切开两个不同的切口比如在目的基因上切口为1和2,那么在载体上切得是1'和2’,最终1和1’连接上,2和2’连接上这样可以有效的防止”相反连接“

别人给的质粒,第一要做的是转化保种啊,别人给那点哪够分析.转化完了自己抽质粒分析.质粒直接跑电泳理论上是三条带,要想分析建议做单酶切再电泳.再问：又做了一次，拿个质粒菌做阳性对照也都没有提出来。不知道

BestreactionforEcoRIishighslatbuffer,whileHindIIIislowsaltbuffer.ManycompanieswilltellyouHindIIIwoul

你说的这种情况确实会发生,我就遇到过.但是几率不会很高.如果加大浓度,连接的几率就大大提高.我曾经专门这样设计过实验呢.不过切质粒后立刻跑胶,而不加连接酶,一般自连是很少见的.“双酶切”可以避免自连的

怎么是两个不同公司的呢.分步酶切吧.比如先用Takara的体系BamHI先切一下,我一般过夜酶切,然后酚-氯仿抽一下DNA,然后再用Fermentas的体系BstBI切过夜.

问题描述不清.“同时做对照：质粒酶切回收的产物电转”?也就是说拿线性的质粒去电转做对照?如果是这样,你不如用感受态细胞直接做阴性对照,再用原质粒转化做阳性对照,这样更好分析结果.多克隆位点是很小一段,

通常先分析一下目的基因上存在哪些常见的酶切位点,再选择合适的克隆载体.保证你双酶切的位点在目的基因上不会出现.PMD18-T克隆位点两侧的酶切位点比较多,很常用的.

单酶切就是只用一个限制性内切酶去切你的质粒,环状的质粒就成为线状的了,但质粒的大小不变双酶切用两个限制性内切酶,质粒上就产生了两个缺口,环状质粒就变成两段线状DNA了.回收你需要的那一段,因为它的两端

发个照片看看.

酶切位点消失啦,测个序看看.再问：测序了，说我的链接质粒没有信号再答：重新做吧，多半不对！

最好是用两种不同的限制酶切,如果用一种酶切割质粒,那么在质粒与目的基因碱基互不配对时就会因为质粒,目的基因都是相同的粘性末端而形成质粒-质粒,目的基因-目的基因这两种错误的组合.所以最好用两种酶.形成

模板DNA几百ng-几ug,区别不大酶10.5ul酶20.5ulbuffer去Takara产品目录查双酶切buffer表,按照那个倍数加,有时候需要BSA水补足20ul30或37度,1-5小时都可以.

首先,你要确定你所切下来的目标条带的分子量大小.如果切下来的片段分子量小的话（小于1kb),经常会出现看不到的情况.因为从质粒上面切下来的片段摩尔数是和质粒一致的,在分子量很小的情况下,等摩尔数的小片

一个是环状质粒一个是切下来的线形质粒一个是两个酶切位点间的序列

BUFFER2如果KPN1是HF的就用4再问：那还用不用加BSA?再答：我一般不管什么切都加了。。。。