PCR扩增为啥有三条带
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/07/13 22:40:39
那就是PCR的问题了,建议用新的试剂再试下,最好先把反应液,酶,引物按比例先配好,再取混合液加引物
引物的功能是作为核苷酸聚合的起始点,引导DNA的合成.能设定循环次数,及控制复制次数.PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度.一般的循环次数选在30~40次之间,循环次数越多,非特异性产物的量亦随之
就只是你的目的基因菌液PCR扩增不出来么?不过我觉得你如果质粒、电泳、菌落PCR都能验证的话,菌液PCR结果如何都意义不大了.
1.先看下PCR电泳图里杂带多不多,若有的话很可能非特异性扩增了2.若条带干净,仍然有可能存在非特异性扩增,引物特异性不高导致竞争结合可将DNA直接酶切看是否能切出你的目标片段3.序列比对结果不能只看
基本不是.当今发展出各色各样的PCR扩增技术,各色各样的高温聚合酶,就是来解决PCR扩增中遇到的扩不出、扩增效率低的问题.如巢式PCR就是扩增那些拷贝数很低的基因片段.有些重复片段的扩增,GC含量高的
北京三博远志长片段PCR扩增试剂盒:长片段PCR扩增试剂盒所用的酶是Taq聚合酶和有校正功能的聚合酶的混合酶,这种混合酶可以染色体和其它细胞器的DNA为模板高效进行PCR反应.在人的染色体上可以扩增出
可能有很多原因,最常见的原因是1.模板不干净,2.引物设计不当,3.退火温度过高,等等
有了大量特定的引物和模板链就可以大量的复制的DNA
做个对照,如果酶没有问题的话.那可以降低一下退火温度或者稍微提高一下模板量再试试.
非特异性扩增优化下pcr条件在不行的话就重新设计引物
原因很多,你是否提到了DNA,可以将你跑的DNA直接跑胶看看,到底有没有条带;PCR扩增的程序有没有问题,或者引物是否有问题,可以找个对照DNA试试,相同扩增条件下,是否扩出条带,如果扩不出来就用可能
一般是不要切胶,直接把第一次的PCR产物取一微升作为底物,再用第二队引物扩增一次,如果引物设计正确,就只会出现一条条带了.如果要计算大小,就按楼上说的.但是雀式pcr的目的就是至少做2次,以保证特异性
用dl2000marker的话,在750bp(从上往下第三条带)和1000bp(第四条带)之间,
你给的条件非常模糊,无法判断.因为PCR的反应条件与很多参数有关系.如模板浓度,引物长度及GC含量,引物浓度,dNTPs浓度,选用的taqenzyme,缓冲液的离子含量,产物大小,变性时间,退火温度及
PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及,④PCR循环条件.寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究. 模板:①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有Taq酶抑制剂,③模板中
这要具体分析.一种可能是你的PCR产物是非特异性片段,所以长度不一,这可以通过和你预期PCR产物的长度进行比较来判断.另一种可能是该基因在不同情况下有不同的剪接模式(alternativesplici
很宽极有可能是扩增出两个或多个大小相近的片段,这种片段测序结果往往都是乱封,是多个序列测序结果叠加在一起的.解决办法,更换特异引物,或者胶浓度加大,比如2%的.电泳时间久一些,比如40分钟,就有可能将
PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95度时解旋,55度时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至72度左右DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链.由PCR技术制造
PCR扩增的结果和模板的质量有直接的关系,在PCR扩增中如果模板纯度高,很低的量都可以进行扩增的.提取细菌的DNA量不多但纯度高,即使DNA电泳检测不到条带,PCR仍然能扩出条带.希望你看明白了.
1退火温度不合适2引物不合适3模板有问题4酶由问题