PCR扩增出来的目的片段跑胶后比想要的小400bp,为什么

这样就P不出来的啊要换模板的必须要比目的基因要长再问：谢谢。只能重新设计了。

目前一般的方法是直接测序了如果酶切,若是你知道多态位点的序列,可以根据这个序列选择内切酶；如果不知道,那就多尝试一下识别位点是4个bp的那几个常用的内切酶吧再问：是不是应该找切开多态位点附近的位点的酶

第二次比如目的基因是300bps,母链DNA2000bpsforwardprimer从母链第25碱基开始由5'-3'开始复制,backwardprimer从第325由3'-5'开始反向复制.第一次复制

扩增目的基因的方法

只要有目的基因的片段存在,无论是质粒还是基因组还是其他类型的DNA片段,都是可以的.

没有必要纠结于这些概念目的基因,就是你要研究的那个基因.除非你要克隆基因全长,不然RT-PCR就是用来扩增一小段（所谓目的基因片段）再问：我想做rt-pcr但是我找了好长时间也没有找到：狗β3-ar引

pcr扩增出来就是目的基因.假设这是一段基因（两条链一个道理我就只表示一条了）--------------+————————=-------------------中间是目的基因,=和+表示它的两端,

这是由你设计的引物决定,一般控制在200bp以下为佳.包括你要检测的目的基因,设计的片段长度也控制在200bp以内.保证扩增效率较为一致.

为了形象,不写ATCG,换个比较容易看懂的形式模板是：abcd123.456efgh上游引物是：987ABCD123下游引物是：456EFGH789（这里为了方便观察下游印务给出了3’-5‘形式,通常

中间有一段未知没有关系啊,从两头已知的里面设计引物,然后进行PCR,克隆到载体上,或者PCR产物直接送去测序,测序结果blast即可

可以,只要你的PCR扩增特异性够强,没有杂带.这其实就是理论和实际的差距,因为表达载体的扩增效率低,如果一次实验不成功,你还要从PCR步骤做起重新收集DNA,而如果克隆至扩增载体,每次只需扩增质粒回收

2个办法1.直接使用提纯试剂盒,去掉其他成分,或者跑胶后切胶提纯2.克隆到载体质粒,再进行其他操作

如果你确认“转化后挑取含有目的片段的单菌落”这个步骤正确的话,就是你的PCR出问题了么,继续扩增便可.目的片段与载体脱离还是保留的菌种失活?应该都不会.我认为你的PCR体系除了问题,换一组酶和buff

.PCR每分钟能扩增多长的片段和PCR仪没有关系,只和你PCR体系中的酶和buffer有关.再问：那到底每分钟能够扩增多少bp的片段啊再答：你看看你用的是什么酶，找找那酶的说明书，上面肯定写了再问：酶

PCR的反应在进行时,的确会产生不需要的片段.实际应用的时候,我们都会在需要的基因片段上染色或者标记萤光.由于价格上的原因,目前国外的实验室都采用染色的方法.而且随着反应的进行,由于大量引物的存在,需

PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物.PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间

应为PCR扩增出来的是混合物,酶切回收后才基本是纯的目的片段.载体一般不用PCR扩增,一般是质粒来源,也需要用切口一致的酶消化回收.之后连起来就好了再问：那PCR扩增出来的混合物里除了目的片段还有什么

是目的基因这样才能说明你转化进去的是连了目的基因的质粒而不是自连的质粒.转化后挑菌摇菌后提了质粒才能测序,浓度才够再问：谢谢，在下是新手。再问一下：是连了目的基因的质粒还是单纯的目的基因呢？提质粒测序

可分为长产物片段和短产物片段两部分.短产物片段的长度严格地限定在两个引物链5'端之间,是需要扩增的特定片段.短产物片段和长产物片段是由于引物所结合的模板不一样而形成的,以一个原始模板为例,在第一个反应

1退火温度不合适2引物不合适3模板有问题4酶由问题