18s设计了好多引物序列 我怎么确定哪两个是一对

这里有primerblast,使用相当方便,就是网速有点慢

一般未知的序列旁边都有已知的一段吧,就是你说的“修饰片段”?PCR这种flankingsequence可以有很多方法,比如TAIL-PCR,用ADprimer（简并引物）和特异性引物就可以得到目标片段

从NCBI中下载基因的序列,再用DNASTAR进行比对,那是保守区域!

你先设计几条引物,然后上NCBI数据库BLAST一下（在外显子上设计比较好些）再问：我的想法是先将已知的序列与同源物种比对，以同源物种多出的区域设计上下游引物，可是这样得到的引物分值太低，怎么办再答：

用primerblast,输进去上下游,选好种属和扩增对象search不就出来了

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/194473617?report=genbank

这问题都上百度知道来问了,你也是生物专业的研究生吧.PrimerPremier5这个软件设计引物用很不错的.

一般要20个碱基的长度,一对,要防止形成发夹.

可以找一下原始文献,或到ncbi里搜索一下.另外ncbi里有个premer-blast可以试一下.---中国西部生命科学论坛再问：primerblast主要进行序列比对，NCBI没有查询到。

cDNA和mRNA的序列是互补的,如果用两个引物,最后的两条DNA序列分别对应于mRNA和cDNA中的一段.由于引物方向从5‘至3’,所以两个引物对应于mRNA和cDNA中相应序列即可.

问师姐最方便.不然把引物序列拿出来,去跑个BLAST,看中间那段gene.不然你做好PCR之后跑个胶嘛,看看大小就行了.

我也做得RT-PCR,是提取某物种中未测序的一段基因.是用近缘物种基因进行比对,得到保守序列设计引物,再提取总RNA,RT-PCR得到目的基因的片段再问：我需要检测的分子，在nucleotide里找不

对于这种情况,如果你只是找不到扩增引物的序列,但是能找到后面所要扩增的序列的话,那么可能还是因为测序引物离你的扩增片断太近.如果不是这种情况,那么可能是你根本没有将扩增片断成功连入当然还有一种可能是公

一般对于已知序列的PCR当然不要从保守序列来设计引物,只要从开放可读框前后开始设计就行了.需要从保守序列设计引物的情况一般是两种,一是某个物种里面某个特定基因序列从未被分离过,但其进化关系相近的物种有

1.有突变,这很常见,再做一次确认.如果确实是的,把结果投GenBank.2.PCR出错了.-重做PCR（比较少见）3.测序出错.建议先做克隆,再测序.这样就可以多挑几个克隆去测序,万一有几个出错,还

根据cDNA序列设计就行了,不用加3‘utr,你做载体构建还是tr-pcr基因检测?再问：做rt-pcr检测。我们老板说要加上3‘utr的序列，不知道为什么？再答：不用加，我做rt-pcr检测那么多了

普通PCR规则：1、18-25bp；2、Tm值在45-60；3、2个引物之间没有超过5bp的互补序列；4、CG%在40-60%；5、避免连续出现3个以上的CCC或GGG；6、不要迷信百度.

当然是dna的啦,引物的设计有很多需要注意的地方哦,不然怎么有primer5、oligo7之类设计引物软件呢.

找近缘种,越近越好,的那个基因都下下来ncbi或软件都可以比对,找高度保守区具体操作为,蛋白序列和DNA序列都下,从连着7-8个蛋白保守区处比着DNA设计引物,如果有四个是G,两个是A就选G,要是一半

这个比较麻烦,如果你想用RACE的方法,3'末端需要添加上像真核生物那样的polyA尾巴,而且你要克隆它的全基因序列,还要做5'RACE.RACE技术比较适合真核生物.如果你要克隆的基