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做流式时 每管的样本量至少是多少呢?我要做脾淋巴细胞CD3 CD4 CD8 谁能告诉我一下我要怎么加荧光抗体

来源：学生作业帮 编辑：百度作业网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/08/09 23:05:09
做流式时 每管的样本量至少是多少呢?我要做脾淋巴细胞CD3 CD4 CD8 谁能告诉我一下我要怎么加荧光抗体
以及同型对照和样品正常对照怎么处理?本人菜鸟,见笑了.
做流式时 每管的样本量至少是多少呢?我要做脾淋巴细胞CD3 CD4 CD8 谁能告诉我一下我要怎么加荧光抗体
量的问题,楼上的已经回答了.
讲一下抗体的用法：
一般1毫升样本加10微升抗体,室温避光孵育半小时,PBS洗涤3次,最后重新悬浮于500微升PBS.还有就是,在加入你要的抗体前,要加入无荧光的非特异性抗体,先孵育15分钟,以封闭细胞表面的Ig受体,这个不需要洗涤.
你除了购买CD34, CD4, CD8三种不同荧光标记的抗体外,还需要另外购买和这三种抗体荧光颜色相同的同型非特异性抗体,比如你的CD抗体都是IgG1,那你就要3种颜色的非特异性IgG1.
上机的时候,除了样本以外,需要如下额外的7个管子来调机器：
1. 不加任何抗体的,用来调节FCS和SCC
2. 3个管子,分别加了同型非特异抗体,经过了孵育和洗涤.分别用来设置3种荧光通道的阴性Gate
3. 3个管子,分别单独加了特异性CD3, CD4 和CD8 荧光抗体的,分别用来设置3种荧光的阳性Gate,并设置机器的compensation
4. 最后才是你加了3个抗体,经过孵育和洗涤的样本
再问： 太谢谢你了，我从我们科里前辈们那里了解到的是没有同型非特异性抗体这一项，也就是没有2步的那三个管子，其他是一样的。请问这样可以么？
再答： 没有这项的数据是不可靠的，至少要做一次。
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