竞争ELISA反应中,抗体固定、封闭后,待测抗原和酶标抗原一起加和分开加有什么区别呢?
来源:学生作业帮 编辑:百度作业网作业帮 分类:语文作业 时间:2024/08/10 12:49:50
竞争ELISA反应中,抗体固定、封闭后,待测抗原和酶标抗原一起加和分开加有什么区别呢?
分开加是:加入待测抗原后,37度温育1小时,洗涤,再加入酶标抗原,37度温育1小时,洗涤,然后显色。
分开加是:加入待测抗原后,37度温育1小时,洗涤,再加入酶标抗原,37度温育1小时,洗涤,然后显色。
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一起加更准确一些.分开加的话,特别是加样时间长的话,先加的会先反应上去,这样不在同一起跑线上,竞争不公平,结果不准确.但如果加样时间很短(具体多短也不好说),影响小.
再问: 分开加时,待测抗原与固定抗体反应,洗涤后,加酶标抗体,如果显色反应颜色深,说明待测抗原少,反应颜色浅,说明待测抗原多,理论上似乎是可以起到竞争作用的。但一起加和分开加的优势分别是什么呢?
再答: 开始错误的理解你的意思,以为是先加,后加,一个是先混到一起再加。 假如抗体为100,抗原(待测)为1-100之间,那么抗体没有完全被占用,这样后加的酶标抗原能有地方吸附,先加后加一个样。 假如抗体为100,但抗原为100-200或者更高,而酶标抗原可能是10-1000,这样先加的话,后面的酶标抗原就无法吸附。高低结果都一样。但一起加入的话,还是能正常的竞争。 当然,这个是我的理解。 你这个分步反应,操作中比较麻烦。一起加的话,一步反应,出结果快。
再问: 那就是一起加比分开加有优势,会不会出现不能一起加,只能分开加的情况?
再答: 应该有吧,比如血清中有物质对酶有抑制作用。
再问: 分开加时,待测抗原与固定抗体反应,洗涤后,加酶标抗体,如果显色反应颜色深,说明待测抗原少,反应颜色浅,说明待测抗原多,理论上似乎是可以起到竞争作用的。但一起加和分开加的优势分别是什么呢?
再答: 开始错误的理解你的意思,以为是先加,后加,一个是先混到一起再加。 假如抗体为100,抗原(待测)为1-100之间,那么抗体没有完全被占用,这样后加的酶标抗原能有地方吸附,先加后加一个样。 假如抗体为100,但抗原为100-200或者更高,而酶标抗原可能是10-1000,这样先加的话,后面的酶标抗原就无法吸附。高低结果都一样。但一起加入的话,还是能正常的竞争。 当然,这个是我的理解。 你这个分步反应,操作中比较麻烦。一起加的话,一步反应,出结果快。
再问: 那就是一起加比分开加有优势,会不会出现不能一起加,只能分开加的情况?
再答: 应该有吧,比如血清中有物质对酶有抑制作用。