在做制备感受态细胞DH5a时,将含有pET-GFP的基因转化给了DH5a,转化后的DH5a确实能够在含Kan的平板上生长

来源：学生作业帮编辑：百度作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/07/22 22:30:44

在做制备感受态细胞DH5a时,将含有pET-GFP的基因转化给了DH5a,转化后的DH5a确实能够在含Kan的平板上生长
但是在进一步做PCR验证时（扩增目的基因）,却又发现在相应大小750bp处没有条带,只有引物二聚体,这是为什么?应该可以排除PCR设定条件的问题,因为跟我同组的人都P出来了,就我没有目的条带.

你确定是Kan抗性吗?如果你的确实是kan的话,平板克隆假阳性的情况很常见.关键PCR设好阳性对照,如果阳性对照有目的条带,而挑的克隆没有,就能说明是假阳性克隆.另外,可以多挑几个克隆,我一般都会挑10-20个.
再问：涂板的时候我做了2组阴性对照，一个板为含有Kan涂有空载DH5a，结果是没长出菌，另一个板为没涂Kan涂有空载DH5a，结果是长出了菌。所以应该不是Kan的问题我觉得。在做PCR时，只做了一组阴性对照，就是没有加DNA模板，结果是没有跑出目的条带。请问您说的假阳性是什么个情况？可以具体些吗？

对比大肠杆菌 DH5a 与 BL21的异同点,观察两者在生长形态上的差别. PCR筛选后发现没有目的条带 ,可是我的DH5a菌株是从含Kan的培养基上划线挑选来扩增的, 菌落PCR有关问题?我们做了转化实验,将转化后的菌涂在含Kan抗性的平板上,为什么挑取能生长的菌落做PCR没有目的条带? 您好,我想问问在细胞转化时,pUC19载体为何选用DH5a菌株,为什么不选择TOP10或JM109呢?是因为价钱关系吗大肠杆菌感受态细胞的制备与转化实验：在转化实验中,涂平板前需要在37度下振荡培养30-60min 用EcorI和SalI酶切目的基因和载体后酶连,然后转化DH5a,涂板后却不长菌,是为什么呢? 用氯化钙制备感受态细胞的做转化后一个菌落都张不出的原因我是按照文献步骤做的呀为什么转化后的大肠杆菌可以在含有抗生素的培养基上生长质粒和目的基因片段分别双酶切（bamh1,xba1）连接后电转感受态细胞,同时将质粒酶切回收的片段转化做对照大肠杆菌感受态细胞制备试验中为什么转化后要在37℃摇床上温育45min BJ5183细胞感受态的制备能不能用PCR直接扩增目的片段,然后转入表达载体,代替在克隆载体或dh5a中的扩增