PCR后DNA跑电泳条带不明显的原因

来源：学生作业帮编辑：百度作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/07/21 01:05:26

PCR后DNA跑电泳条带不明显的原因

问的很模糊呀!下次应该吧具体情况描述清楚,不然很难回答你呀!
条带不明显的意思是由你要的目标条带,但是,条带不亮对吧!那么可以试一下下列办法
1 在反应体系中加入稍为多一些的Mg离子
2 降低反应的温度
3 调整模板量,模板量太多或者太少均得不到很亮的条带.
4 增加循环数!
再问：谢谢啊，可是为什么要降低反应温度呢。我做的是一个梯度温度，应该跟温度没关系。重新跑了一下竟然什么条带都没有了，这是为什么呢？我是一学生，加的东西都是老师给的。
再答：恩！上面的那四点都是大致的情况，降低温度，增加Mg浓度实际上就是减少PCR产物特异性的！这样可以增加条带亮度！但是你以前可以扩出条带，现在扩不出来，那么分析可能一下几个原因， 1 你加反应体系的时候出问题了！把反应体系列在旁边的纸上，加一个，打一个勾！ 2 当然，上面只是非常特殊的情况，还有一种可能是模板降解了！如果不放心，最好是能换一下！ 3 以上两个可能是最应该排除的，之后，可以采用20ul体系中加入1.4-1.5ulMgCl2的方法，扩增35个循环，在看看。同时考察目的片段的GC含量，看看是否需要换成GC buffer 4如果还出不来，那么还可以在调节一下PCR反应条件，适当增加退火时间！祝好运

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