小鼠基因型鉴定没有目的条带和内参只有引物二聚体

来源：学生作业帮编辑：百度作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/06/28 21:27:24

小鼠基因型鉴定没有目的条带和内参只有引物二聚体
我做的是小鼠基因型鉴定,采用的是25nM NaoH/0.2mMEDTA 40mM Tris HCl PCR 基因组DNA模板测定显示DNA含量0.997ug/ul 但OD260/OD280=1.1 做PCR的时候没有目的条带请问是模板的原因么?

OD260/OD280=1.1
DNA中蛋白太多了,会影响到PCR的过程.
还有模板中最好不要有EDTA,会螯合镁离子,影响DNA聚合酶的扩增.
再问：那要怎么改良呢？
再答：把模板过柱子纯化下。

PCR只有引物二聚体的条带,没有目的基因条带 RNA反转录后,分别用内参引物和目的基因引物扩增,目标基因有条带,内参没有扩出来,问题可能处在什么地方做RT-PCR时,上下引物退火温度一定要一样吗?内参条带很亮,为什么没有目的基因? PCR之后电泳没有条带,连引物二聚体都没有?这是怎么回事了? 我做的是分子鉴定真菌,用的是通用引物ITS1和ITS4,pcr扩增后只有marker有条带,其他的都没有是什么原因. RT PCR只跑出内参的条带,没有目的基因,原因有哪些? RT-PCR中内参蛋白GAPDH和b-actin人和小鼠的可以用同一对引物吗? PCR扩增目标基因,完全没有条带.是不是设计的引物太短?引物只有10个碱基和模板配对转基因小鼠的基因型如何鉴定请教做染料法荧光定量PCR,熔解曲线分析,如何区分目的基因产物和引物二聚体呢? 我做的RT-PCR怎么样让内参一致?刚入门老板让做内参的条件反复做也没有要P出来的目的条带我的退火温度是55 可以 PCR产物引物二聚体严重,目的片段很淡,怎么解决啊?

小鼠基因型鉴定 没有目的条带和内参 只有引物二聚体