蓝白斑筛选假阴性为什么蓝白斑筛选会出现假阴性

来源：学生作业帮编辑：百度作业网作业帮分类：综合作业时间：2024/07/11 14:54:51

蓝白斑筛选假阴性
为什么蓝白斑筛选会出现假阴性

此类载体携带lacZ’基因,它编码β-半乳糖苷酶的N-末端（α-肽）,并且处于可被安慰诱导物IPTG（异丙基硫代半乳糖苷,与乳糖结构类似但不能被β-半乳糖苷酶降解）诱导的启动子调控之下.质粒转化的宿主菌为LacZ△M15 基因型（含有编码N-末端缺陷型的β-半乳糖苷酶多肽的基因）.未重组的质粒转化宿主菌后,在IPTG 的诱导下,质粒与基因组分别表达缺陷但可以相互补偿的两个肽（即α-互补）,形成了有功能的β-半乳糖苷酶,该酶能把培养基中无色的X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷）底物分解成半乳糖和深蓝色的5-溴-4-氯-靛蓝.然而当外源DNA 插入质粒位于α-肽编码序列中的多克隆位点时,由于破坏了α-肽的阅读框架,因而不能表达出与宿主菌基因组表达的缺陷型β-半乳糖苷酶多肽发生α-互补.由于没有β-半乳糖苷酶的酶解作用,致使重组菌形成白色菌落.由此,可以借助蓝白斑很容易筛选出重组子.
不过实际操作中发现当插入小片段时,重组子也有形成浅蓝斑的情况.即蓝色菌斑也有可能含外源基因.据最新报道,大概有30%的假阴性.

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