用天根的试剂盒(离心柱法)提DNA,两个样本结果怎么样?是不是有很大问题?
来源:学生作业帮 编辑:百度作业网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/08/19 02:34:48
用天根的试剂盒(离心柱法)提DNA,两个样本结果怎么样?是不是有很大问题?
用天根的试剂盒(离心柱法)提DNA,两个样本结果分别为OD260/280=1.69,浓度97ug/ml;OD260/280=1.7,浓度25ug/ml.希望有高人指点~
用天根的试剂盒(离心柱法)提DNA,两个样本结果分别为OD260/280=1.69,浓度97ug/ml;OD260/280=1.7,浓度25ug/ml.希望有高人指点~
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基因组DNA的260/280的值一般在1.6-1.8之间.(虽然和洗脱液有关,但一般都偏低)
就是浓度低了点,不过这个和样品、裂解是否充分等等有关.样品应该没问题,继续用.
再问: 我今天又提了几个,浓度还是很低,基本都在40ng/ml,请问怎么补救?
再答: 可能是裂解不够充分。(组织的话,研磨和破碎一定要充分,细胞的话煮一下也是可以的) 但是即使是这么低的浓度,还是能用的吧。
再问: 我做的事人血,也可以煮一下吗?多少度煮啊?煮多久? 我今天去了500ul血,裂解大约十分钟,需要再久一点吗?
再答: 哦,血液的话不是这样的,不用煮。 列举几个步骤你自己看一下: 1.没有充分裂DNA和蛋白质,没有通过涡旋振荡充分解离开,然后,离心取上清的时候,没有解离的DNA随着蛋白质沉淀一起被沉淀丢失,就会导致DNA产量低。(不知道天根的试剂盒有没有涡旋这一步,但是原理是一样的) 2.起始DNA含量是否因为血液保存反复冻融本身就低;或者血液样本来自使用免疫抑制剂的病人,血液中淋巴细胞少,提取的DNA浓度也会低些。 40ng/ml?还是40ng/ul?如果是后者,继续往下做pcr什么的这点浓度也够了。
再问: 哦,是40ug/ml 没有我选这一步,明天试试找个涡旋振荡的仪器 是肿瘤患者的血液,应用化疗可能会引起白细胞减低,可能也有这个原因吧 如果我要做多个位点的PCR,这个量也够吗?大约10个位点
再答: pcr的话,pg级的就可以检测出来了,这个量也够了。
就是浓度低了点,不过这个和样品、裂解是否充分等等有关.样品应该没问题,继续用.
再问: 我今天又提了几个,浓度还是很低,基本都在40ng/ml,请问怎么补救?
再答: 可能是裂解不够充分。(组织的话,研磨和破碎一定要充分,细胞的话煮一下也是可以的) 但是即使是这么低的浓度,还是能用的吧。
再问: 我做的事人血,也可以煮一下吗?多少度煮啊?煮多久? 我今天去了500ul血,裂解大约十分钟,需要再久一点吗?
再答: 哦,血液的话不是这样的,不用煮。 列举几个步骤你自己看一下: 1.没有充分裂DNA和蛋白质,没有通过涡旋振荡充分解离开,然后,离心取上清的时候,没有解离的DNA随着蛋白质沉淀一起被沉淀丢失,就会导致DNA产量低。(不知道天根的试剂盒有没有涡旋这一步,但是原理是一样的) 2.起始DNA含量是否因为血液保存反复冻融本身就低;或者血液样本来自使用免疫抑制剂的病人,血液中淋巴细胞少,提取的DNA浓度也会低些。 40ng/ml?还是40ng/ul?如果是后者,继续往下做pcr什么的这点浓度也够了。
再问: 哦,是40ug/ml 没有我选这一步,明天试试找个涡旋振荡的仪器 是肿瘤患者的血液,应用化疗可能会引起白细胞减低,可能也有这个原因吧 如果我要做多个位点的PCR,这个量也够吗?大约10个位点
再答: pcr的话,pg级的就可以检测出来了,这个量也够了。
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