为什么用Folin酚法和考马斯亮蓝法测蛋白质含量,结果会有很大差异
来源:学生作业帮 编辑:百度作业网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/07/11 20:38:05
为什么用Folin酚法和考马斯亮蓝法测蛋白质含量,结果会有很大差异
实验是用牛血清蛋白制作标准曲线,测定白菜中的蛋白质含量,用Folin酚法和考马斯亮蓝法分别测,结果会有很大差异(Folin酚法是考马斯法的大概两三倍).大家都是这个结果,所应应该不是操作失误.那么从原理上分析可能是什么原因呢?
实验是用牛血清蛋白制作标准曲线,测定白菜中的蛋白质含量,用Folin酚法和考马斯亮蓝法分别测,结果会有很大差异(Folin酚法是考马斯法的大概两三倍).大家都是这个结果,所应应该不是操作失误.那么从原理上分析可能是什么原因呢?
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大概与样品中的干扰物质有关.
干扰Folin酚法的物质有:酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等.
干扰考马斯法的:主要是去污剂,如 Triton X-100、十二烷基硫酸钠(SDS)和0.1N的NaOH.(如同0.1N的酸干扰Lowary法一样).
植物样品经常会含有酚类、有机酸等,提取蛋白可能用到Tris,这是常见的干扰物.检查一下操作程序吧.
测定浓度时用buffer作空白对照了吧?
干扰Folin酚法的物质有:酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等.
干扰考马斯法的:主要是去污剂,如 Triton X-100、十二烷基硫酸钠(SDS)和0.1N的NaOH.(如同0.1N的酸干扰Lowary法一样).
植物样品经常会含有酚类、有机酸等,提取蛋白可能用到Tris,这是常见的干扰物.检查一下操作程序吧.
测定浓度时用buffer作空白对照了吧?
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