荧光显微镜背景充分黑暗的原因,原理
来源:学生作业帮 编辑:百度作业网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/08/01 05:43:07
荧光显微镜背景充分黑暗的原因,原理
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我能够想到四个重要因素影响背景是亮还是暗(我的经验来自生物学的组织/细胞免疫荧光染色实验):
光圈.光圈开得大,顾名思义所有光信号包括背景信号都会增强.
曝光时间.光信号再强,你只选取其中很少一部分来成像,也能够控制图像中的信号强度.
样品/玻片本身的自发荧光.
样品的非特异性染色.
总体是一个所有检测手段中共通的问题,即信噪比,信号与噪声比率.
1,2对信噪比影响不大,在背景过强时很难通过调整1,2来解决问题.如果背景不存在过强问题,则通过1确保有用信号足够强,通过2减低曝光时间至背景充分黑暗即可.
3,4才是控制信噪比的关键因素.自发荧光无法完全避免,只能通过选取自发荧光较低的材料来控制,另外固定及染色过程中的一些试剂有可能影响样本的自发荧光.非特异性染色是更为常见的造成背景问题的原因,通过优化封闭条件,抗体/试剂用量,染色时长与温度等条件来调整.
光圈.光圈开得大,顾名思义所有光信号包括背景信号都会增强.
曝光时间.光信号再强,你只选取其中很少一部分来成像,也能够控制图像中的信号强度.
样品/玻片本身的自发荧光.
样品的非特异性染色.
总体是一个所有检测手段中共通的问题,即信噪比,信号与噪声比率.
1,2对信噪比影响不大,在背景过强时很难通过调整1,2来解决问题.如果背景不存在过强问题,则通过1确保有用信号足够强,通过2减低曝光时间至背景充分黑暗即可.
3,4才是控制信噪比的关键因素.自发荧光无法完全避免,只能通过选取自发荧光较低的材料来控制,另外固定及染色过程中的一些试剂有可能影响样本的自发荧光.非特异性染色是更为常见的造成背景问题的原因,通过优化封闭条件,抗体/试剂用量,染色时长与温度等条件来调整.